SmArtFect 质粒转染试剂-贴壁
SmArtFect Plasmid Transfection Reagent
产品信息
货号 | 名称 | 规格 | 价格(元) |
DY20006 | SmArtFect 质粒转染试剂-贴壁 | 0.5mL | 3600 |
DY20006 | SmArtFect 质粒转染试剂-贴壁 | 1mL | 5960 |
DY20006 | SmArtFect 质粒转染试剂-贴壁 | 1.5mL | 8460 |
产品描述
SmArtFect质粒转染试剂一种由生物可降解材料制备的转染试剂。专门用于质粒DNA的转染,可高效转染多种贴壁细胞(转染阳性率高达90%),如一般细胞株、肿瘤细胞株等。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同,SmArtFect 质粒转染试剂采用生物可降解材料配制,对细胞的毒性很低,转染后细胞死亡率不到10%。该转染试剂使用也非常方便,先将转染试剂与质粒DNA混合,再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中,血清不影响其转染效果,不必刻意添加或更换培养基。
保存方式
-20°C 避光保存,有效期为1年。使用前轻轻混匀。
使用方法(仅供参考)
该流程以24孔板为例,其他规格培养板的试剂用量参照下面表格。
不同培养体系中各个试剂用量表
培养皿 | 每孔表面积(c㎡) | 转染缓冲液(µL) | 质粒转染试剂(µL) | 1µg/µL质粒(µL) | 完全培养基(µL) |
96孔 | 0.3 | 2×10 | 0.5 | 1.4 | 100 |
48孔 | 0.8 | 2×25 | 1.3 | 6 | 250 |
24孔 | 2 | 2×50 | 2.5 | 12 | 500 |
12孔 | 4 | 2×100 | 5.0 | 24 | 1000 |
6孔 | 10 | 2×200 | 10 | 60 | 2000 |
A. 细胞接种:
1. 转染前24小时左右对细胞进行转接,培养过夜;
2. 确保转染时细胞密度为90%左右;
3. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基,以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
B. SmArtFect /DNA复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µL 转染缓冲液,再加入2.5µL的转染试剂。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µL 转染缓冲液,再加入12 µL的1µg/ µL质粒。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3. 将DNA-转染缓冲液混合物滴加至SmArtFect-转染缓冲液混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。
注意: SmArtFect-转染缓冲液混合物和DNA-转染缓冲液混合物的混合次序非常重要,切勿颠倒。
注意:离心管最好使用聚丙烯离心管。
C.转染:
1. 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。
2. 培养12小时后即可观察,最佳观察或收获时间为24~48小时。
3. SmArtFect在完全培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。如果转染后需要更换新鲜培养基,
请于加入SmArtFect /DNA复合物12~24小时后进行。
注意事项
1. 转染前的细胞汇合度以90%左右为宜,转染时细胞生长状态应保持良好,不要有支原体污染。
2. 首次转染,建议进行优化实验,如24孔培养板,每孔质粒用量 0.8ug,转染试剂用量可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。
3. 应避免转染复合物制备体系中存在血清,因血清会干扰SmArtFect与DNA形成复合物,转染所用培养基中尽量不要使用抗生素。
4. 如果需要稳转,请在转染24-48h后加入筛选培养基。
5. 本试剂主要用于质粒DNA转染。