脂质体转染试剂 Liposome SmArt2000 Transfection Reagent
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| DY20001 | 脂质体转染试剂 | 1mL | 845 |
产品描述
脂质体转染试剂适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围
贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。适用于质粒DNA和siRNA的转染。
保存方式
4℃避光储存，有效期1年。
本品避免冷冻。
使用方法
质粒DNA的转染
对大多数细胞来说，DNA(µg)与转染试剂（µL）的比例为1:2～1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。
1. 以24孔板为例
贴壁细胞：转染前一天，用500µl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使第二天能达到70-90%密度。
悬浮细胞：在准备DNA-转染试剂复合物前，用500µl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。
2. 对每个转染样品，进行以下操作
a. 在微量离心管里分别加入50µl Opti-MEM I Reduced Serum Medium和0.8µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。
b. 在另一个微量离心管里分别加入50µl Opti-MEM I Reduced Serum Medium和2.0µl 转染试剂（注意用前先混匀），轻柔混匀，制成转染试剂稀释液，室温静置5分钟。
c. 将DNA稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟，形成DNA-转染试剂复合物。DNA-转染试剂复合物在室温下可稳定存在6小时。
3. 将DNA-转染试剂复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。
4. 在37℃ CO2培养箱中培养4～6小时后更换培养基，继续培养18～48小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化
为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和转染试剂的比例以及细胞密度进行优化，一般在1:0.5～1:5的范围内优化DNA(µg)和转染试剂(µl)的比例。
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及转染试剂用量
| 细胞培养板 | 每孔面积 | 培养基用量 | DNA转染 | siRNA | |||
| 铺板培养基用量 | 稀释培养基用量 | DNA | 转染试剂 | RNA | 转染试剂 | ||
| 96-well | 0.3cm2 | 100uL | 2×25µl | 0.2µg | 0.5µl | 5pmol | 0.25µl |
| 24-well | 2cm2 | 500uL | 2×50µl | 0.8µg | 2µl | 20pmol | 1µl |
| 12-well | 4cm2 | 1mL | 2×100µl | 1.6µg | 4µl | 40pmol | 2µl |
| 6-well | 10cm2 | 2mL | 2×250µl | 4µg | 10µl | 100pmol | 5µl |
| 60mm皿 | 20cm2 | 5mL | 2×0.5ml | 8µg | 20µl | 200pmol | 10µl |
| 100mm皿 | 60cm2 | 15mL | 2×1.5ml | 24µg | 60µl | 600pmol | 30µl |
细胞转染注意事项（建议进行预实验，来摸索最佳条件）
1. 高纯度的DNA或RNA才能获得较高的转染效率。用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无内毒素，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故用无血清培养基转染效果更好。
2. 转染时细胞必须处于良好生长状态，转染时细胞的密度一般铺板率在达到70～80%最好（此时细胞处于对数生长期）。
3. 转染时注意脂质体和质粒的用量，过量的话对细胞毒性大也容易失败。
4. 转染作用6小时一定记得要换含血清的培养基。
5. 培养基以及洗涤细胞和稀释用的培养基要无血清、无双抗。
6. 培养基中的血清：在开始准备DNA和转染试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。其实，只要在DNA-转染试剂复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。
7. 培养基中的抗生素：抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率降低。
8. 一般在转染24～48h，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，24～48h后即可进行靶基因表达的检测实验。
9. 如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。
常见细胞的转染效率（仅供参考，实验条件不同转染效率会有较大差别）
| 细胞种类 | HEK293 | 293T | 293F | HCT 116 | WRL -68 | HepG2 | NIH/3T3 |
| 转染效率 | 99% | 99% | 99% | >80% | ～80% | ～80% | ～80% |
| 细胞种类 | THP-1 | Hela | MCF-7 | CHO-S | TS cell | HO1980 | A549 |
| 转染效率 | >50% | >80% | >80% | 97% | >60% | >60% | >80% |
| 细胞种类 | MEF | BE(2)C | CHO | Chok1 | Hep3B | C2C12 | Neuro-2a |
| 转染效率 | >50% | 77% | 96% | >50% | >80% | >80% | >70% |
| 细胞种类 | HUVEC | MDCK | Hep2C | WEHI | B50 | Calu1 | L929 |
| 转染效率 | >80% | >80% | >80% | >80% | >70% | >70% | >70% |
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