1、用24孔板进行试验时，向各孔中加入培养基体积10 %的CCK-8溶液。一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。

2、CCK-8在0-5 ℃下能够保存至少6个月，在-20 ℃下避光可以保存1年。

3、如果没有450 nm的滤光片，还可使用450 nm到490 nm之间的滤光片。

4、如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差？

可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。

5、在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？

有时会有影响。如果药物具有还原性，会和CCK-8发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。

6、每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？

原因可能会有以下几个：

① 当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加PBS，不作为测定孔用。 

② 有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。 

③ 每孔的细胞数量过多或过少，请预先摸索接种细胞数。

7、如何设定空白对照？

在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。

8、哪些物质会影响CCK-8的测定？

体系中存在还原性物质会影响CCK-8的测定，例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多，酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。

9、在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？

可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由3小时缩短为1-2小时。

10、在CCK-8显色过程中，如何终止反应？

 以96孔板为例，可以有如下几种方法：

① 在显色反应后，将培养板放置4 ℃冰箱内。

② 每孔加10 μL 0.1 M HCL溶液。

③ 每孔加10 μL 1%（w/v）的SDS（十二烷基硫酸钠）溶液。注意：反应停止后，应在24小时之内测定。

11、如果加入的药物中含有金属，是否会有影响？

金属对CCK-8显色有影响，终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会分别抑制显色反应5 %、15 %、90 %，降低反应的灵敏度，当其终浓度达到10 mM时，将会100 %抑制显色反应。

12、悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？

悬浮细胞由于染色比较困那，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。