荧光实时定量技术（Real-Time PCR，qPCR）是当前一项常用的生物技术。该技术1996年由美国Applied Biosystems公司推出，经过二十多年的发展，现已广泛用于生物、临床、食品、转基因等多种领域的定性、定量研究。qPCR扩增试剂是qPCR实验中不可或缺的产品，也是决定qPCR实验结果稳定性、可靠性的重要因素。在qPCR预混液产品中，我们常常会看到No ROX和with ROX的不同类型，那么什么是ROX，产品又该如何选择呢？

一、什么是ROX

ROX（Passive Reference Dye）是一种惰性参比染料，在PCR反应中能被PCR仪检测到。它不参与PCR反应，且荧光信号值是稳定的，不会随着PCR扩增发生改变。qPCR实验过程中存在很多引起孔间差异的因素，例如不均匀的照明、孔与孔之间液滴、气泡等光学因素的影响（图1），反应体系的浓度差异。此时，可以选择ROX作为阳性参比，对其他荧光信号进行归一化校正，以提高数据的精确度。

（图1）

*在PCR过程中，如果使用的PCR反应板封膜质量不好，受到水蒸气的影响，容易产生变形，从而引起“光学扭曲”现象（optical warping）。使用了ROX作为参比染料后，可有效校正因这种变形引起的荧光信号变化。加入ROX进行校正，不仅是可以消除由于激发光强和检测光强引起的误差,而且可以消除加入MASTERMIX的误差。

二、注意事项

ROX是ABI的专有染料，加在反应体系中之后用以平衡荧光强度的管间差。即在一批配制的反应液中的ROX浓度是一样的，这样，它们不同管之间的ROX荧光强度也应该是一样的。由于ABI的仪器检测荧光是用CCD模式，由于检测角度的不同，会形成荧光强度的管间差，这样，就会影响以荧光强度表示PCR产物多少的定量准确性。检测ROX的荧光强度，并根据ROX的荧光强度变化，去除这种管间差，可以使得FAM的检测更准确。ROCHE、ROTOR GENE的仪器仪器不存在光强差，一般不需要用ROX进行校正。

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