胶原酶化学名为胶原蛋白水解酶（collagen），一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro 序列并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键，来源于溶组织梭状细胞芽孢杆菌，主要水解结缔组织中胶原蛋白，唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶。

对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大，因此适合分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。当需要消化的组织较硬，内含许多结缔组织与胶原成分时，可采用胶原酶解离细胞。

胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害，对细胞损伤小。该酶分离效果好即使有钙镁离子存在仍有活性，可用PBS和含血清的培养基配制，操作简便又可提高细胞成活率。根据胶原酶活性的差异分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ等几种类型，根据分离消化的组织类型选择合适的胶原酶类型。

Ⅰ型胶原酶含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性），主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。

Ⅱ型胶原酶含有更高的梭菌蛋白酶活性，适用于肝脏、骨、肌肉、胸腺、甲状腺、心脏和唾液组织细胞的分离。

Ⅳ型胶原酶含有低胰酶活性，包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等，适用于胰岛组织细胞制备，或者需要维持受体完整性细胞制备实验，也能消化多种组织，对哺乳动物的组织有广谱的消化作用。

胶原酶的使用

钙镁离子与血清不会影响胶原酶分消化作用，因此可用D-hanks或者pbs或含血清的培养基配制（终浓度200U/mL），将配制好的胶原酶过0.22μm微孔滤膜抽滤除菌备用（现用现配）。

1. 在超净台中将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm左右小块（越小越好）。

2. 将组织块放入离心管中加入30~50倍体积的胶原酶溶液，旋紧盖子。

3. 将烧杯放入37℃恒温震荡水浴箱进行消化。消化时间根据组织的类别而定，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。上皮组织经胶原酶消化后，由于上皮细胞对此酶有耐受性，可能仍有一些细胞团未完全分散，但成团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长，因此，如无特殊需要可以不必再进一步处理。

4. 收集消化液（有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤），离心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者无血清培养液离心漂洗1~2次，去除上清，加培养液制成细胞悬液，接种培养瓶或培养皿。