异丙基-β-D-硫代半乳糖苷

Isopropyl β-D-thiogalactoside（IPTG）

产品信息 

产品描述

IPTG是一种极强的诱导剂，不被细菌代谢而且十分稳定，X-gal为生色底物，二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG可诱导载体lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补 (α互补)。实现α互补的细菌暴露IPTG，铺在含有X-gal生色底物的培养基上，可形成蓝色菌落。外源DNA插入质粒的多克隆位点后可破坏α互补作用,将产生白色菌落。IPTG常用于需要诱导β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与X-Gal或Bluo-Gal结合使用，用于重组细菌菌落的蓝白筛选，这些菌落可以诱导lac操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG与lac I阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用，防止β-半乳糖苷酶编码基因lacZ的抑制。

保存方式

 -20℃保存，有效期5年。

产品性质

CAS：367-93-1

分子式：C₉H₁₈O₅S

分子量： 238.30

外观：白色粉末

纯度：≥ 99%

溶解性：50 mg/mL Water

操作说明

储存液配制

1）用去离子水配制0.1 M的储存液；

2）用5-10 mL去离子水润湿0.22 μm针孔过滤，0.22μm滤膜除菌上述IPTG溶液。分装成1 mL，-20℃冻存，有效期可达1年。

蓝白斑筛选

1. X-Gal、IPTG加入琼脂培养基溶液

1）高压灭菌已加琼脂的培养基，并冷却到50℃左右。

2）每毫升培养基内加入10 μL 20 mg/mL X-Gal溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其终浓度达到1 mM）；

3）加入适量抗生素；

4）混匀后按照平板大小倒入适量培养基，待培养基冷却至室温后，接种细菌于37℃过夜培养。  

2. X-Gal、IPTG加到琼脂平板表面

1）于无菌超净工作台制备平板（如LB琼脂板）；

2）取40 μL 0.1 M IPTG和120 μL 20 mg/mL X-Gal混合，均匀涂于准备好的平板上；

注意：平板边缘较难充分涂均匀，容易产生假阳性，因此为了得到更好结果，建议后续操作中尽可能在平板中间挑取单克隆。

3）37℃孵育直至所有液体被吸收（30 min或更长）。接种细菌于37℃过夜培养直到菌落形成。

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IPTG