SmArt First Strand cDNA Synthesis Kit(4x)(+gDNA Remover)
产品描述
本产品是一种高效、稳定cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒中5x gDNA wiper Mix 包含一种新型双链特异性热敏 DNase (HL-DNase)，可在2分钟内从 RNA 制备中去除污染的基因组 DNA，而不会对 RNA 质量或数量造成损坏。针对双链 DNA 的高度特异性HL-DNase活性确保单链 DNA（如 cDNA 和引物）不会被切割，HL-DNase处理的 RNA 可直接添加至逆转录反应中。4x RT Mix包含反转录所需要的所有组分，只需要添加RNA模板和RNase-free ddH2O即可进行反转录反应。其中包含RNase inhibitor可以有效抑制RNaseA、B、C，减少了RNA的降解，可保证低浓度模板的反转录效率。4x RT Mix中包含的逆转录酶，具有更强的RNA亲和力和热稳定性，可以直接在55℃进行逆转录反应。减少操作过程，缩短时间。合成效率高，反应可在15分钟内完成。
产品组份
组分 | 100 T |
5 x gDNA Wiper Mix | 300 µL |
4x RT Mixa | 500 µL |
RNase-free ddH2 | 1 mL |
a.包含dNTPs，RNase inhibitor
保存条件
≤0℃运输，-30 ~ -15℃保存，有效期2年。
适用范围
本产品广泛适用于动物、植物以及微生物 RNA 的逆转录反应，逆转录产物兼容染料法和探针法 qPCR。
产品特点
1、具有更高的cDNA合成效率。
2、宽广的cDNA温度合成范围（42-60℃）。
3、可适用于GC含量高，二级结构复杂的模板。
注意事项
1、防止RNase污染：请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase-free。
2、在冰上操作，防止发生RNA降解。
3、试剂解冻后需要进行混匀后离心后置于冰上操作。
4、试剂使用前需要短暂离心。
需准备的材料
材料
● RNase-free 1.5 mL离心管、0.2 mL PCR管、移液器吸头。
● 移液器、PCR仪、冰或移动冰盒。
RNA
● 高质量的RNA对于获得高质量的cDNA至关重要。实验前请用电泳验证RNA的完整性。
实验流程
1. 基因组DNA去除
5 x gDNA Wiper Mix | 3 µL |
Totol RNA or Poly A+ RNA | 10 pg-5 µg |
| 10 pg-500 ng | |
RNase-free ddH2O | 补足到15 µL |
在RNase-free离心管中用移液器轻轻吹打混匀。25°C ，2 min。
2. 配制第一链cDNA合成反应液
在第1步的反应管中直接加入4 × RT Mix
4 x RT Mixa | 5 µL |
第1步的反应 | 15 µL |
用移液器轻轻吹打混匀。
3. 进行反转录反应
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
55℃ | 5～30 min* |
85℃ | 5 min |
*可以根据后续实验目的灵活调节逆转录时间，qPCR 5～15min，PCR 15～30min。
产物可立即用于PCR或qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70°C保存。cDNA避免反复冻融。
售前咨询专员