10%一步法PAGE彩胶快速配置试剂盒
产品信息
产品名称 | 编号 | 规格 | 价格(元) |
10%一步法PAGE彩胶快速配置试剂盒 | DY50074 | 125T | 280 |
产品介绍
本试剂盒适用于Tris-甘氨酸电泳体系,其中包括PAGE凝胶制备所需全套试剂,只需制胶器具,不需要封闭分离胶,不需要额外加入TEMED,即可制备PAGE凝胶。所配置的浓缩胶带有颜色,便于上样。本试剂盒中新型促凝剂在4℃稳定保存至少六个月。
本试剂盒分离胶和浓缩胶缓冲液均含有SDS,只适用于变性凝胶电泳。
产品内容
货号 | 产品组成 | 产品体积 |
DY50074-A | 浓缩胶溶液 | 80 ml |
DY50074-B | 浓缩胶缓冲液 | 80 ml |
DY50074-C | 分离胶溶液 | 250 ml |
DY50074-D | 分离胶缓冲液 | 250 ml |
DY50074-E | 新型促凝剂 | 8ml |
保存条件
本试剂盒保存于4℃,其中新型促凝剂长期储存置于-20℃,18个月有效。
产品特色
方便:无需液封,分离胶灌制完直接加入浓缩胶
快速:省去繁琐计算稀释操作,约15min即可凝胶
安全:彻底告别TEMED,避免接触过硫酸铵粉末,远离有毒试剂
可靠:方法更可靠,电泳效果好,小分子条带更清晰
操作步骤
Ⅰ. 灌制凝胶(以一块0.75/1.00/1.50mm厚的mini胶为例)
1. 取等体积的分离胶溶液和分离胶缓冲液,各2.0/2.7/4.0mL,混匀。
2. 取等体积的浓缩胶溶液和浓缩胶缓冲液,各0.5/0.75/1.0mL,混匀。
3. 向步骤1已混合溶液中加入40/60/80μL的新型促凝剂,轻轻吹打混匀,避免产生气泡。将混匀后的溶液注入凝胶模具中,使液面距离短玻璃板上沿约1.5cm即可。
4. 向步骤2已混合溶液中加入10/15/20μL的新型促凝剂,轻轻吹打使其混匀,不需要等待分离胶凝固,可直接将混匀后的溶液缓慢均匀注入分离胶溶液上面,插入梳子。
注意:灌注浓缩胶时一定要缓慢均匀,移液枪头对着玻璃壁左右滑动,让浓缩胶溶液缓慢均匀沿玻璃壁流下去,避免将浓缩胶溶液冲入分离胶。
6. 静置约15分钟,等待胶凝固,将胶板放置于电泳缓冲液中,慢慢拔出梳子,即可进行常规电泳操作。
注意:胶凝固后上下胶分界线平整度会弱于传统方法配置的胶,但对后续电泳没有影响。
Ⅱ. 电泳条件
1. 使用快速电泳缓冲液(AP1091)进行电泳:恒压180-200V,约25-35min;
2. 使用Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(AP0281):恒压150V,约60min;
注:本试剂盒规格0.75mm厚度凝胶,125块/pack;1.00mm厚度凝胶,92块/pack;1.50mm厚度凝胶,62块/pack
注意事项:
1.本产品制备的凝胶,浓缩胶对样品没有浓缩效应,与预制胶类似,但与传统PAGE胶相比,对蛋白条带分离效果更好。
2.凝胶速度与温度有显著的正相关性。同等条件下,温度越高,凝胶速度越快,室温过高时建议适当减少新型促凝剂的用量;相反,室温较低,可适当延长凝胶时间。
3.在配胶之前,将胶溶液及缓冲液平衡到室温,可有效避免制胶中气泡的形成;
4.浓缩胶缓冲液内含有无迁移染料,长期静置后会产生沉淀,使用前请轻柔混匀。
附表1.SDS-PAGE 分离胶的浓度与最佳分离范围
SDS-PAGE 分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6% PAGE 凝胶 | 50-300kD |
8% PAGE 凝胶 | 30-150kD |
10% PAGE 凝胶 | 20-100kD |
12% PAGE 凝胶 | 15-60kD |
15% PAGE 凝胶 | <40kD |
本产品仅作科研用途