BCA 蛋白定量试剂盒 

BCA Protein Quantitation Assay Kit

产品信息

产品描述

BCA 蛋白定量试剂盒（BCA Protein Quantitation Assay Kit）是根据最常用的 BCA 蛋白浓度检测法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单化、稳定性高、灵敏度高、兼容性好。最小检测浓度达到10 µg/mL，最小检测蛋白量达到0.2µg，样品体积为1-20 µL。在20-2000 µg/mL浓度范围内有较好的线性关系。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5% 的SDS，5% 的 TritonX-100，5% 的Tween20、Tween60、Tween80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA 低于10 mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1 mM，β-巯基乙醇低于0.01%。

产品组成

保存方式

BSA蛋白标准品-20℃保存，其它组分4℃保存，有效期12个月。

操作说明

BCA工作液配制：将试剂A和试剂B按照体积比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL试剂A与1mL试剂B混合，配成51mL BCA工作液。两者混合时会有沉淀形成，彻底混匀后沉淀消失。

1. 试管检测方法

1） 取150ul  5 mg/mL BSA标准品加入600ul PBS溶液稀释至1 mg/mL。

2） 按照下表配置BSA标准测定溶液。

                                                      BSA标准品体系配制

3） 取干净的试管，分别加入100 μL待测蛋白样品，并做好标记，推荐每个样品做2-3个平行反应。

4） 在每个标准品及待测样品管中分别加入2 mL BCA工作液，37℃放置30 min，也可以室温放置2小时或 60 ℃放置30分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低, 适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。

5） 在562 nm处测其吸光度值，并记录读数；以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。

6） 制作标准曲线并计算样品中的浓度。如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请稀释样品或重新提取。

2. 微孔板检测方法

1） 标准样品的配置和BCA工作液的配置与试管检测方法一致。

                                              BSA标准品体系配制

2）在微孔板的孔中加入20 μL待测样品，每个样本2-3个平行重复。

3）向微孔板中加入200μL BCA工作液混匀, 37 ℃放置30分钟，也可以室温放置2小时,或 60 ℃放置30分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低, 适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间

4）测定562 nm处的吸光值，并记录读数；以不含BSA的样品的光吸收值作为空白对照。

5）绘制标准曲线并计算样品中的蛋白浓度，如果所得蛋白浓度不在检测范围，请稀释样品或重新提取。

注意事项：

1. 在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或30℃温育溶解，若发现细菌污染则应丢弃。

2. 样品中若含有EDTA, EGTA,DTT, 硫酸铵及脂类会影响结果，请用Bardford方法。高浓度的去垢剂也会影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。 

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