考马斯亮蓝G250

Coomassie Brilliant Blue G

产品信息

产品描述

考马斯亮蓝G250 (Coomassie Brilliant Blue G250) 是考马斯染料家族的成员之一，属于三苯甲烷类染料。考马斯亮蓝G250的染色原理为：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的作用力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子 (如磺酸基)，从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。考马斯亮蓝有G250和R250两种，“G”为Green，G250指具有淡绿色调的蓝色染料，“R”为Red，R250染料泛微红色调。考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析，考马斯亮蓝R250更多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色。

考马斯亮蓝G250用于Bradford法进行蛋白浓度测定，该方法灵敏度比Lowry法高，可测定微克级蛋白质含量，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。此法原理是酸化的G250溶液 (即Bradford试剂) 为阳离子、双质子化形式，溶液为红色，最大吸收波长 (Amax) 为470 nm，当与蛋白质稳定结合后，G250变为阳离子、非质子化形式，溶液变为蓝色，Amax为595 nm。蓝色形式染料的量与样本中蛋白的量成正比，因此595 nm的吸光度可反映蛋白量。此法反应时间短，结合的G250-蛋白质复合物室温下稳定保持1 h，反应灵敏度也很高。

考马斯亮蓝G250的用于蛋白质染色时检测灵敏度虽然比R250低，但也可替代R250。因其在低于pH 2.0时，溶液无色，pH 7.0时溶液呈深蓝黑色；若发生酸化，溶液呈现透明的棕褐色。当G250与蛋白结合，溶液又回到蓝色，主要因为蛋白分子溶液偏中性的pH环境。合适条件下，当把胶放在酸化的G250溶液中染色，显示出蓝色的蛋白条带，背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色，且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚，则不需要做褪色处理。大部分蛋白用G250检测的下限是0.5 µg。虽然灵敏度降低，但是操作快速且方便，比R250染色节省时间约11 h。

保存方式

常温保存。

产品性质

别名： 酸性蓝90，亮蓝，考马斯亮蓝G，康美赛蓝G250，Brilliant Blue G， Acid Blue 90，Coomassie Brilliant Blue G，CBBG

性状：蓝色至深紫色粉末

CAS：6104-58-1

分子式：C₄₇H₄₈N₃O₇S₂Na；

分子量：854.02

溶解性：溶于热水 (50 mg/mL)，微溶于冷水，乙醇 (40 mg/mL)，甲醇，10% 三氯乙酸

纯度： ≥ 90%

使用方法

凝胶染色方法

1) 考马斯亮蓝G250染色液的配制

将0.2 g G250溶于100 mL水中(需要加热至50°C促进溶解)。冷却后，加入100 mL 1M的硫酸。室温放置3 h，最长可过夜，然后滤纸除杂。过滤后的溶液，小心加入22.2 mL 10 M 的KOH，然后加入28.7 g 三氯乙酸 (TCA)。混匀后室温放置> 3 h，再过滤除杂从而获得琥珀般的棕色溶液，不含蓝色沉淀。                        

2) 染色只需将胶完全浸在此染色液中，约15 min后条带就会显示出来。几小时后染色条带的亮度和灵敏度会进一步加强。

3) 染色液室温约稳定存放2-3周。

Bradford法测蛋白浓度测定

1)  染液的配制

将100 mg的G250溶解于50 mL 95％的乙醇中，加入85％(w/V)的磷酸l00 mL，加水定容至1 L。

2)  标准曲线的绘制

在7个试管中分别加入含0、10、20、30、40、50、60 μg标准蛋白质溶液，用水补足到60 μL加3 mL染色液，混匀后室温放置15 min，至595 nm处比色测定。以蛋白质含量为横坐标，A595的值为纵坐标绘制标准曲线。

3)  测定

取未知浓度的样品60 μL，同上测定，从标准曲线上查出相应的含量。

该方法反应快、操作简便、消耗样品少，但不同蛋白质间的差异大，标准曲线的线性不好，显色受时间和温度影响较大。考马斯亮蓝染色能力强，特别要注意比色杯的清洗。较高浓度的去污剂 (Triton X-100，SDS等)、尿素和硫酸铵对测定有干扰。  

产品说明书下载

考马斯亮蓝G250.pdf