分散酶II(来源于多粘芽孢杆菌)
Dispase II (from Bacillus polymyxa)
产品信息
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
DY50211 | 分散酶II(来源于多粘芽孢杆菌) | 100mg | 400 |
DY50211 | 分散酶II(来源于多粘芽孢杆菌) | 1g | 3600 |
产品描述
中性蛋白酶(Neutral protease),商业名称Dispase II,也称分散酶II,普遍用于不同组织和器官中的细胞分离。Dispase II是一种非特异性金属蛋白酶,能快速有效且温和的破坏组织细胞外基质释放单细胞培养物(原代细胞培养物)或收集已培养的细胞将其转移到新的培养基质上(传代培养)。另外,还能预防悬浮细胞培养过程中发生的成团现象。Dispase II极其稳定,不会受温度、pH和血清内容物的干扰;通过螯合剂或稀释很容易失活;酶活温和,对细胞损伤小,可良好维持细胞膜完整性。
本品来源于多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa),无支原体或其他动物病毒污染。以非无菌的冻干粉形式提供,比活力≥0.8 U/mg蛋白,使用前需进行除菌。常用工作浓度范围为0.6-2.4 U/mL。反应最佳pH: 6.0-8.5。激活剂:最佳Ca2+浓度为2 mM,该酶已含足量Ca2+ 确保最佳酶活力。抑制剂: EDTA, EGTA, Hg2+ 以及其他重金属。该酶活性不受血清干扰。
保存方式
2-8℃干燥保存,可保存24个月。
操作说明
一、储存液和工作液制备
1)储存液制备:用Hepes缓冲盐溶液(50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase II冻干粉,配制成10 mg/mL的储存液,用0.22 µM滤膜过滤除菌。本储存液置于2-8℃,2周稳定;根据单次用量分装冻存,高达2个月稳定,避免反复冻融。
2)工作液制备:使用时用合适的细胞培养液将储存液稀释到工作液浓度即可,常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。不推荐使用> 2.4 U/mL的工作浓度。具体使用浓度请根据自身实验体系或参考文献来调整。
二、组织的解离
1)用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成小块;
2)用无菌PBS清洗组织块;
3)向上述组织块中加入Dispase II溶液(工作浓度为0.6-2.4 U/mL),确保全部浸没。
4)37℃孵育,孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。
注意:若第一次使用该酶,可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织,1 h即可达到分离目的,也可以孵育更长时间。
5)如有需要,可用无菌不锈钢网筛过滤,以分开单细胞与残留的组织块,或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞,如有必要,换用新鲜酶溶液以进一步解离残留组织。
6)离心沉淀细胞,倒掉酶溶液;
7)用培养基重悬细胞沉淀,并于常规条件下培养细胞。
三、 细胞传代
1)利用Dispase 溶液(37℃预热)浸没细胞,于37℃孵育5 min;
2)吸除上述溶液,继续于37℃孵育10 min;
3)显微镜下观察细胞分离情况,如需要,可进一步孵育15 min;
4)利用细胞培养基悬浮细胞,轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞;
5)换用新鲜细胞培养液重悬细胞,并按常规方法进行细胞铺板。