SmArt反转录预混液(5×)
SmArt RT Master Premix(5×)
产品信息
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
DY10502 | SmArt RT Master Premix(5×) | 100 T | 875 |
产品描述
本制品是2步法 Real Time RT-PCR 用的理想反转录反应试剂。SmArt RT Master Premix(5×)中含有定量 RT-PCR 的反转录反应所需的所有试剂(SmArt RTase,RNase Inhibitor,Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Reaction Buffer),加入模板RNA和水,即可迅速进行反应,操作非常方便。使用该逆转录预混液20分钟内最长可获得12 kb甚至更长大小的cDNA。
产品组分
SmArt RT Master Premix(5×) | 400 μL |
RNase Free ddH2O | 1 mL×2支 |
SmArt RT Master Premix(5×)含有 SmArt RTase、RNase Inhibitor、Random Primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Reaction Buffer(含有 Mg2+)。
保存方式
-20℃保存。有效期12个月。
产品特点
1. 制品为预先混好的Premix形式,只需加入模板RNA和水便可以开始反应。
2. 使用无RNase H活性的M-MLV反转录酶,并且具有良好的热稳定性,反转录温度范围为37℃到60℃。
3. 使用了Random Primers和Oligo dT Primer 2种反转录引物,可以合成适合Real Time PCR用cDNA。
操作方法
1. 反转按下列组份配制 RT 反应液(反应液配制请在冰上进行)。
试剂 | 使用量 |
SmArt RT Master Premix(5×) | 4 μL |
Total RNA | * |
RNase Free ddH2O | up to 20 μL |
* 反应体系可按需求相应放大,20 μL反应体系可使用10ng-2000 ng 的Total RNA和1-500ng 的mRNA。
2. 轻柔混匀后进行反转录反应,条件如下:
25℃ 5 min
50℃ 15 min(反转录反应),高GC模板可适当提高温度。
85℃ 5 sec(反转录酶的失活反应)
4℃
【注意】得到的RT反应液加入到下一步的Real Time PCR反应体系中,其加入量不要超过Real Time PCR反应体积的1/10(V/V)
注意事项
1. SmArt RT Master Premix(5×)在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于SmArt RT Master Premix(5×)粘度高,用移液枪慢慢反复吸打充分混匀后使用。
2. 分装试剂时务必使用新的枪头(Tip),以防止样品间污染。
3. 本制品中已经加入了反转录 Primer(Oligo dT Primer和 Random Primers),如果要使用Gene Specific Primer进行反转录反应,则不能使用本制品。